Los métodos antes revisados para el diagnóstico ante-mortem de distemper son altamente dependientes del estadío de la infección, de la condición clínica del paciente y no siempre cumplen con los requerimientos de sensibilidad y especificidad.
Los recientes desarrollos de las técnicas de biología molecular revelan la utilidad de estos métodos con propósitos diagnósticos, como también para estudios patológicos y epidemiológicos.
La Reación de la Plolimerasa en Cadena por transcripción reversa (RT-PCR) para la detección del RNA viral del CDV representa un método diagnóstico antemortem, altamente sensible y específico, temprano y seguro, utilizando muestras de sangre, suero y fluído cerebroespinal, independiente de los hallazgos clínicos, histopatológicos; de los títulos de anticuerpos y de la distribución del antígeno viral, en casos agudos y crónicos.
La RT-PCR como prueba diagnóstica es capaz de amplificar fragmentos del ácidos nucleicos en forma exponencial, aún encontrándose en la muestra una sola molécula, indetectable por otros métodos, logrando determinar la infección desde el segundo día de iniciada.
Generalmente se amplifican fragmentos del gen que codifica la nucleoproteina (NP), una región conservada dentro del genoma viral. Además, puede aplicarse al estudio de variaciones genéticas del virus, mediante caracterización molecular de secuencias claves del genoma.
Este virus también ha sido detectado en la sangre de los cachorros clínicamente normales hasta 10 días después de la vacunación con vacunas de virus atenuados, por lo que se debe tener cuidado en la interpretación de los resultados de estos pacientes.
La sensibilidad del método depende de la muestra utilizada, de la técnica de recogida, del estadio de la enfermedad, del método de extracción de ácidos nucleicos, de los cebadores (partidores o primers) y del método de PCR. Se mejora aún más la sensibilidad analítica si se utiliza la capa leucocitaria para la extracción de RNA.
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